1. Со помош на пастерова пипета се капнува капка физиолошки раствор во средината на предметното стакленце.

2. Се фламбира езата и се чека неколку секунди за да се излади.

3. Петри садот се принесува на околу 10 см од пламеникот. Со помош на палецот и показалецот, се подига капакот онолку колку што е доволно слободно да се пристапи со езата до колонијата од која материјалот ќе биде земен. Притоа се одбираат поединечни колонии, добро издвоени една од друга, додека количината на материјалот треба да биде сосема мала. Садот се затвора без да се фламбира. Врвот од езата се потопува во капката, материјалот внимателно се хомогенизира и се размачкува во вид на тенок филм, при тоа се внимава филмот да не ги допира рабовите од предметното стакленце. Езата се фламбира за да се уништи преостанатиот материјал, и се положува на држачот. Филмот се суши на собна температура или високо над пламеник.

4. По сушењето на филмот, стакленцето се поставува на сталакот на кадичката, така што страната на филмот да е свртена нагоре.

5. Се аплицира генцијан виолет и се остава да бои во тек од 1-2 минути. Аплицирањето е такво што местото на размазот се прелева со вишок од бојата така да филмот е потполно потопен во неа.

6. По истекот на пропишаното време бојата се одлева, а веднаш потоа се додава лугол на ист начин и се остава за време од 1 минута.

7. По истекот на одреденото време луголот се одлева, и се промива со 96% етанол или ацетон. Третманот со етанол трае се додека постои издвојување на боја од препаратот што може да се следи ако плакнењето се врши над бела позадина.

8. Потоа, препаратот се третира максимум 20-25 секунди со сафранин.

9. Препаратот се остава да се суши на воздух или се суши со помош на филтер хартија.

10. Препаратот се набљудува под олеоимерзија.

РЕЗУЛТАТ: По боењето бактериите можат да бидат Грам-позитивни или Грам- негативни. Бактеријата Escherichia coli е Грам-негативна, стапчеста бактерија.